上期为大家分享了关于PCR灵敏度和标准曲线的知识，这期继续为大家带来荧光定量PCR实验相关知识。

1、熔解曲线高矮

Tm值相同，而峰高低有差异是表达丰度不同，同样的扩增产物也会出现Tm值有微小差异，一般差异在1度以内都可以接受。熔解曲线的纵坐标表示荧光信号对温度的一阶负导数。

2、定量PCR没有扩增

可以尝试把定量PCR的产物跑个电泳，看看有无产物，如果电泳有条带，说明PCR是成功的，只是荧光信号没有读取到，这时要调整染料或探针的浓度（看你是染料法还是探针法）；如果电泳没有条带，那么还要在定量PCR仪上优化实验条件。虽然你在普通PCR仪上优化过条件，但换了定量PCR仪，由于两台仪器的升降温速度及温度精密度等指标存在差异，同样的条件做不出PCR也是可能的。

由于很多因素的影响，扩增子的熔解温度会有一定变异。熔解温度会受特殊缓冲液的pH值，所用Taq聚合酶，SG和MgCl₂浓度和其他因素的影响。要做熔解曲线的对比你首先要确保所用的条件相同。

以上就是小编为大家分享的关于荧光定量PCR实验问答<第三期>的内容，希望可以对大家有所帮助。华博基因是生命科学领域专业技术服务商，主营业务：外泌体冻干粉产品及服务、基因编辑和分子标记辅助育种、基因定位克隆、品系鉴定、蛋白互作、代谢分析，数据挖掘与分析等。

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