山东华博基因工程有限公司（简称华博基因）是一家致力于为客户提供全流程动植物分子育种系统解决方案，集研发、设计、生产、销售为一体的高新技术企业。

上期我们为大家分享了曲线不光滑和荧光强度的问题，本期继续为大家带来有关荧光定量PCR实验相关的内容。

1、荧光定量PCR的灵敏度

对于染料法的荧光定量来说， Ct值的范围为15-35。Ct值小于15，认为扩增在基线期范围内，未达到荧光阈值。理想情况下，Ct值与模板起始拷贝数的对数存在线性关系，也就是标准曲线。通过标准曲线，扩增效率为100%时，计算出基因单个拷贝数定量的Ct值在35左右，若大于35，理论上模板起始拷贝数小于1，可认为无意义。

2、标准曲线要重复两三次吗?

没有人说做定量PCR标准曲线要重复两三次，只是用来做标准曲线的梯度点最好不要少于4个，否则标准曲线准确性不高哦。

3、关于荧光定量标准曲线的制作

一般的仪器虽然声称能进行单拷贝检测，但如果不是特别设计的体系，很难做到100拷贝以下的准确定量，一般用来做标准曲线的最小浓度为1000拷贝，再往下可靠性就降低了，这并不是稀释或其他什么问题，而是本身选作标准曲线的浓度以及定量浓度最好不要低于1000拷贝，如果再低一点，100拷贝也勉强可以接受，否则即使做出来，认可度也不会太高。

山东华博基因工程有限公司（简称华博基因），起源于2018年，是一家致力于为客户提供全流程动植物分子育种系统解决方案，集研发、设计、生产、销售为一体的高新技术企业。核心业务：外泌体冻干粉产品及服务、基因编辑和分子标记辅助育种、基因定位克隆、品系鉴定、蛋白互作、代谢分析，数据挖掘与分析等。同时公司拥有外泌体纯化和修饰，MBL抗体，Biomiga分子试剂、小分子化合物、预装柱及蛋白纯化填料、细胞株、菌株等生命科学研究必备产品；以及自动还原糖测定仪、生物传感分析仪器等检测仪器。华博基因拥有先进的理念和技术，专业的技术团队，满足客户需求。欢迎来电咨询，我们将第一时间接听您的来电：0531-80695877！