山东华博基因工程有限公司（简称华博基因）是一家致力于为客户提供全流程动植物分子育种系统解决方案，集研发、设计、生产、销售为一体的高新技术企业。华博基因拥有丰富的实验实践经验，为此小编将“荧光定量PCR”实验中常见问题做成系列，希望能帮助到大家。

 1、在做标准曲线时，发现线性关系还行，R平方0.998。但是扩增效率只有80%，另外扩增曲线也不是太光滑；

 2、用了SYBR作为荧光染料，但样品的荧光强度只有100-200左右；

 那么发生以上两种情况时，解决方法是什么呢？

发生曲线不光滑，有时是跟染料的量相关，可以加大看看，或者就是扩增产物太少了。

（1）PCR反应效率差：

  引物，试剂PCR条件的原因。

  做realtime-pcr优化体系很重要，扩增效率低，可以选择增加Mg离子的浓度，如果其他条件都好了，还不行，那就是引物的原因，这种情况只能重新设计引物了。

（2）PCR中混入影响反应的物质：

  如发生种情况就是模板提取方法需要改进了。

（3）样品稀释不准确：

  这点很重要！！！做标准曲线效果不好的时候，很多都是倍比稀释的问题，正常情况10倍比稀释时，前后是相差3.32个循环。

  山东华博基因工程有限公司是一家致力于为客户提供全流程动植物分子育种系统解决方案，集研发、设计、生产、销售为一体的高新技术企业。主营业务：基因编辑育种、分子标记辅助育种、基因组选择与预测育种、基因定位克隆、基因编辑后代鉴定、品系鉴定、蛋白互作、代谢分析、指纹图谱及分子身份证构建，数据挖掘与分析等，同时与山东省科学院合作研发自动还原糖测定仪、生物传感分析仪器，并代理日本MBL抗体，美国Biomiga试剂盒、GLPBIO小分子试剂、德国库柏纯化填料、德国赫施曼精准测量仪器、润基外泌体、以及细胞株、菌株等培养类产品。欢迎来电咨询，我们将第一时间接听您的来电：0531-80695877！