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06-28
2023
实用篇|荧光定量PCR问题疑难解答<第十三期>
发布者:本网站 浏览次数:556
上期向大家分享了PCR实验的三个问题，本期我们继续深入了解PCR相关知识。想要回顾之前几期内容和获取新知识的老师们，可以扫描下方微信二维码，关注我们华博官方微信服务号。
1. 一些公司荧光定量试剂盒的酶是比普通Tag酶要好，主要是可以防止引物二聚体产生，引物二聚体少了，扩增效率自然高了。
2. 也可能是用的荧光定量的体系比普通的PCR体系要优化，比如有些公司荧光定量mix中的Mg离子浓度要高于普通的PCR体系。
3. 可能是跑胶的问题。这时候可以看看Marker还和以前一样亮吗？
做荧光定量的短片段特别容易污染。可能是枪被污染了，要是用的跑电泳的那把枪，如果在35个循环后起峰，污染不算严重。可以把荧光定量PCR的基线调节到恰好高过阴性对照。
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